一、外傷感染模型構(gòu)建選擇依據(jù)

二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程（以金黃色葡tao球菌感染的全層皮膚缺損模型為例）

1. 材料準(zhǔn)備

• 動(dòng)物：C57BL/6或BALB/c小鼠（8-10周齡，雄性更佳）

• 病原體：金黃色葡tao球菌（USA300，MRSA臨床株）

• 器械：活檢穿孔器（6 mm直徑）、紅外線測(cè)溫儀、無(wú)菌縫合包

2. 手術(shù)步驟

1. 術(shù)前處理：

• 麻醉（異fu烷），背部剃毛，碘伏+酒精交替消毒3次。

• 皮下注射鎮(zhèn)痛藥（如卡洛芬5 mg/kg）。

2. 創(chuàng)面制作：

• 用活檢穿孔器在背部脊柱旁制造全層皮膚缺損（直徑6 mm，深達(dá)筋膜層）。

• 止血（無(wú)菌棉簽輕壓）。

3. 細(xì)菌接種：

• 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液（OD600=0.6），PBS調(diào)整至1×10^7 CFU/20 μL。

• 將20 μL菌液均勻滴加至創(chuàng)面，覆蓋無(wú)菌硅膠圈（防止舔舐）。

4. 術(shù)后管理：

• 單籠飼養(yǎng)，每日觀察創(chuàng)面滲出、紅腫情況。

3. 關(guān)鍵參數(shù)

• 細(xì)菌劑量：1×10^7 CFU/創(chuàng)面（導(dǎo)致持續(xù)感染但不致死）

• 觀察周期：3天（急性期）、7-14天（慢性期/愈合評(píng)估）

三、其他常見(jiàn)外傷感染模型構(gòu)建

1. 急性切口感染模型

• 操作：

1. 背部做1 cm手術(shù)切口，深達(dá)皮下。

2. 切口內(nèi)注入10 μL菌液（1×10^6 CFU）。

3. 4-0絲線縫合，48h后拆線觀察感染。

• 適用：術(shù)后切口感染預(yù)防研究。

2. 異物植入感染模型（生物膜研究）

• 操作：

1. 皮下植入無(wú)菌硅膠片（5×5 mm）。

2. 接種5 μL菌液（1×10^5 CFU）于植入物表面。

3. 7天后取出植入物，超聲震蕩后CFU計(jì)數(shù)。

• 檢測(cè)：掃描電鏡觀察生物膜結(jié)構(gòu)。

3. 燒傷感染模型

• 操作：

1. 背部90℃熱水接觸10秒，制造Ⅲ度燒傷（需病理確認(rèn)）。

2. 立即接種銅綠假單胞菌（1×10^5 CFU）。

3. 覆蓋半封閉敷料模擬臨床環(huán)境。

四、感染評(píng)估與數(shù)據(jù)分析

五、注意事項(xiàng)與優(yōu)化策略

1. 感染劑量控制：

• 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定不導(dǎo)致全身播散的局部感染劑量（如MRSA USA300的LD50約1×10^8 CFU）。

2. 創(chuàng)面標(biāo)準(zhǔn)化：

• 使用活檢穿孔器可保證創(chuàng)面大小一致，避免手工切割的變異性。

3. 減少動(dòng)物自損：

• 佩戴Elizabethan項(xiàng)圈或使用苦味劑（如Denatonium benzoate）防止舔舐。

4. 模擬慢性傷口：

• 糖尿病小鼠（db/db）或局部應(yīng)用糖皮質(zhì)激素延緩愈合。

六、模型局限性及解決方案

• 局限性：

• 小鼠皮膚愈合速度遠(yuǎn)快于人類（需延長(zhǎng)觀察期或使用免疫抑制）。

• 難以模擬人類傷口的復(fù)雜微生物組。

• 解決方案：

• 聯(lián)合多種病原體（如金葡+銅綠假單胞菌）模擬混合感染。

• 使用豬模型（皮膚結(jié)構(gòu)與人類更相似）。